Un monde un combat
─Coopération internationale pour construire une communauté mondiale de destin commun répondant au défi de la pandémie de COVID-19
Le nouveau coronavirus qui balaie le monde a entraîné une crise pandémique mondiale de COVID-19.Le nouveau coronavirus n'a pas de frontières, aucun pays ne sera épargné par cette bataille contre le COVID-19.En réponse à cette pandémie mondiale de COVID-19, Liming Bio-Products Corp contribue à soutenir le bien-être de nos communautés mondiales.
Notre monde est actuellement confronté à l'impact sans précédent de la nouvelle pandémie de maladie à coronavirus 2019 (COVID-19).A ce jour, aucun médicament efficace n'est disponible pour le traitement de cette maladie.Cependant, de nombreux tests de diagnostic ont été développés pour la détection du COVID-19.Ces tests sont basés sur des méthodes moléculaires ou sérologiques pour détecter les nouveaux biomarqueurs d'acide nucléique ou d'anticorps spécifiques au coronavirus.Comme COVID-19 a atteint un statut pandémique, le diagnostic précoce de la nouvelle infection à coronavirus est essentiel pour évaluer la propagation du virus et le contenir, mais un test parfait pour une utilisation universelle n'existe pas encore.Nous devons savoir quels tests pourraient potentiellement être utilisés pour le dépistage, le diagnostic et le suivi de l'infection au COVID-19, et quelles sont leurs limites.Il est très important de savoir comment mieux utiliser ces outils scientifiques et aider à identifier et contrôler l'émergence de cette maladie grave et à propagation rapide.
Le but de la détection du nouveau coronavirus est de déterminer s'il s'agit d'un individu infecté par le COVID-19 ou d'un porteur asymptotique susceptible de propager le virus de manière silencieuse, afin de fournir des informations essentielles pour guider la prise de décision en matière de traitement clinique.Des études antérieures ont montré que 70 % des décisions cliniques dépendent des résultats des tests.Lorsque différentes méthodes de détection sont utilisées, les exigences des kits de réactifs de détection sont également différentes.
Figure 1
Figure 1:Diagramme montrant les étapes clés des niveaux généraux de biomarqueurs au cours de l'évolution typique de l'infection au COVID-19.L'axe X indique le nombre de jours d'infection et l'axe Y indique la charge virale, la concentration d'antigènes et la concentration d'anticorps à différentes périodes.L'anticorps fait référence aux anticorps IgM et IgG.La RT-PCR et la détection d'antigènes sont utilisées pour détecter la présence ou l'absence d'un nouveau coronavirus, ce qui est une preuve directe de la détection précoce des patients.Dans la semaine suivant l'infection virale, la détection par PCR ou la détection de l'antigène est préférée.Après l'infection par le nouveau coronavirus pendant environ 7 jours, l'anticorps IgM contre le nouveau coronavirus a progressivement augmenté dans le sang du patient, mais la durée d'existence est courte et sa concentration diminue rapidement.En revanche, l'anticorps IgG contre le virus apparaît plus tard, généralement environ 14 jours après l'infection virale.La concentration d'IgG augmente progressivement et persiste longtemps dans le sang.Ainsi, si l'IgM est détectée dans le sang du patient, cela signifie que le virus s'est récemment infecté, ce qui est un marqueur précoce de l'infection.Lorsque l'anticorps IgG est détecté dans le sang du patient, cela signifie que l'infection virale existe depuis un certain temps.On l'appelle aussi infection tardive ou infection antérieure.On le voit souvent chez les patients qui sont en phase de récupération.
Les biomarqueurs du nouveau coronavirus
Le nouveau coronavirus est un virus à ARN composé de protéines et d'acides nucléiques.Le virus envahit le corps (humain) de l'hôte, pénètre dans les cellules via le récepteur ACE2 correspondant au site de liaison et se réplique dans les cellules hôtes, ce qui amène le système immunitaire humain à répondre aux envahisseurs étrangers et à produire des anticorps spécifiques.Par conséquent, les acides nucléiques et les antigènes du flacon et les anticorps spécifiques contre le nouveau coronavirus peuvent théoriquement être utilisés comme biomarqueurs spécifiques pour la détection du nouveau coronavirus.Pour la détection des acides nucléiques, la technologie RT-PCR est la plus couramment utilisée, tandis que les méthodes sérologiques sont couramment utilisées pour la détection des nouveaux anticorps spécifiques au coronavirus.Actuellement, il existe une variété de méthodes de test disponibles que nous pouvons choisir pour tester l'infection au COVID-19 [1].
Principes de base des principales méthodes de test pour le nouveau coronavirus
De nombreux tests de diagnostic pour COVID_19 sont disponibles à ce jour, avec plus de kits de test recevant chaque jour une approbation en vertu d'une autorisation d'utilisation d'urgence.Bien que les nouveaux développements de tests sortent avec tant de noms et de formats différents, tous les tests COVID_19 actuels reposent essentiellement sur deux technologies majeures : la détection d'acide nucléique pour l'ARN viral et les immunodosages sérologiques qui détectent les anticorps spécifiques du virus (IgM et IgG).
01. Détection d'acide nucléique
La transcription inverse-réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR), l'amplification isotherme médiée par boucle (LAMP) et le séquençage de nouvelle génération (NGS) sont les méthodes courantes d'acide nucléique pour la détection du nouvel ARN de coronavirus.La RT-PCR est le premier type de test pour le COVID-19, recommandé à la fois par l'Organisation mondiale de la santé (OMS) et le Centre américain de contrôle et de prévention des maladies (CDC).
02.Détection sérologique des anticorps
L'anticorps est une protéine protectrice produite dans le corps humain en réponse à l'infection virale.L'IgM est un type d'anticorps précoce alors que l'IgG est un anticorps de type plus tardif.L'échantillon de sérum ou de plasma est généralement examiné pour la présence de types spécifiques d'IgM et d'IgG de l'anticorps pour l'évaluation des phases aiguës et convalescentes de l'infection au COVID-19.Ces méthodes de détection à base d'anticorps comprennent le test d'immunochromatographie à l'or colloïdal, l'immunochromatographie au latex ou sur microsphère fluorescente, le test d'immunoabsorption enzymatique (ELISA) et le test de chimioluminescence.
03. Détection d'antigène viral
L'antigène est une structure du virus reconnue par le corps humain qui déclenche le système de défense immunitaire pour produire des anticorps pour éliminer le virus du sang et des tissus.Un antigène viral présent sur le virus peut être ciblé et détecté en utilisant un dosage immunologique.Comme l'ARN viral, les antigènes viraux sont également présents dans les voies respiratoires des personnes infectées et peuvent être utilisés pour diagnostiquer la phase aiguë de l'infection au COVID-19.Par conséquent, il est souvent recommandé de prélever des échantillons des voies respiratoires supérieures tels que la salive, les écouvillons nasopharyngés et oropharyngés, les expectorations de toux profonde, le liquide de lavage bronchoalvéolaire (BALF) pour le test antigénique initial.
Sélection de méthodes de test pour le nouveau coronavirus
La sélection d'une méthode de test implique de nombreux facteurs, notamment le cadre clinique, le contrôle de la qualité des tests, le délai d'exécution, les coûts des tests, les méthodes de prélèvement d'échantillons, les exigences techniques du personnel de laboratoire, les exigences en matière d'installations et d'équipements.La détection d'acides nucléiques ou d'antigènes viraux consiste à fournir une preuve directe de la présence des virus et à confirmer le diagnostic d'une nouvelle infection à coronavirus.Bien qu'il existe de nombreuses méthodes de détection d'antigènes, leur sensibilité de détection du nouveau coronavirus est théoriquement inférieure à celle de l'amplification RT-PCR.Le test d'anticorps est la détection des anticorps anti-virus produits dans le corps humain, qui est en retard dans le temps et ne peut souvent pas être utilisé pour une détection précoce pendant la phase aiguë de l'infection virale.Le cadre clinique des applications de détection peut varier et les sites de collecte d'échantillons peuvent également être différents.Pour la détection des acides nucléiques et des antigènes viraux, l'échantillon doit être prélevé dans les voies respiratoires où le virus est présent, comme les écouvillons nasopharyngés, les écouvillons oropharyngés, les expectorations ou le liquide de lavage bronchoalvéolaire (BALF).Pour la détection basée sur les anticorps, un échantillon de sang doit être prélevé et examiné pour détecter la présence d'anticorps anti-virus spécifiques (IgM/IgG).Cependant, les résultats des tests d'anticorps et d'acide nucléique peuvent se compléter.Par exemple, lorsque le résultat du test est négatif en acide nucléique, négatif en IgM mais positif en IgG, ces résultats indiquent que le patient n'est pas actuellement porteur du virus, mais qu'il a été guéri de la nouvelle infection à coronavirus.[2]
Avantages et inconvénients des nouveaux tests de coronavirus
Dans le protocole de diagnostic et de traitement de la nouvelle pneumonie à coronavirus (version d'essai 7) (publié par la Commission nationale de la santé et l'administration d'État de la médecine traditionnelle chinoise le 3 mars 2020), le test d'acide nucléique est utilisé comme méthode de référence pour le diagnostic du nouveau infection à coronavirus, tandis que le test d'anticorps est également considéré comme l'une des méthodes de confirmation du diagnostic.
Constatations pathogènes et sérologiques
(1) Résultats pathogènes : L'acide nucléique du nouveau coronavirus peut être détecté dans les écouvillons nasopharyngés, les expectorations, les sécrétions des voies respiratoires inférieures, le sang, les matières fécales et d'autres échantillons à l'aide des méthodes RT-PCR et/ou NGS.Il est plus précis si les échantillons sont obtenus à partir des voies respiratoires inférieures (expectoration ou extraction des voies respiratoires).Les échantillons doivent être soumis pour analyse dès que possible après le prélèvement.
(2) Résultats sérologiques : les IgM spécifiques du virus NCP deviennent détectables environ 3 à 5 jours après leur apparition ;L'IgG atteint un titrage d'au moins 4 fois plus pendant la convalescence par rapport à la phase aiguë.
Cependant, la sélection des méthodes de test dépend des emplacements géographiques, des réglementations médicales et des paramètres cliniques.Aux États-Unis, le NIH a publié les directives de traitement de la maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) (mise à jour du site : 21 avril 2020) et la FDA a publié la politique relative aux tests de diagnostic pour la maladie à coronavirus 2019 pendant l'urgence de santé publique (publiée le 16 mars 2020 ), dans lequel le test sérologique des anticorps IgM/IgG sélectionnés uniquement comme test de dépistage.
Méthode de détection des acides nucléiques
La RT_PCR est un test d'acide nucléique très sensible conçu pour détecter si l'ARN du nouveau coronavirus est présent ou non dans l'échantillon respiratoire ou autre.Un résultat de test PCR positif signifie la présence d'un nouvel ARN de coronavirus dans l'échantillon pour confirmer l'infection au COVID-19.Un résultat de test PCR négatif ne signifie pas l'absence d'infection virale car il pourrait être affecté par une mauvaise qualité de l'échantillon ou un moment de la maladie lors de la phase de récupération, etc.Bien que la RT-PCR soit un test très sensible, elle présente plusieurs inconvénients.Les tests RT-PCR peuvent demander beaucoup de travail et de temps, et dépendent essentiellement de la haute qualité de l'échantillon.Cela peut être un défi car la quantité d'ARN viral varie non seulement énormément entre différents patients, mais peut également varier au sein d'un même patient en fonction des moments où l'échantillon est collecté ainsi que des phases d'infection ou de l'apparition des symptômes cliniques.La détection du nouveau coronavirus nécessite des échantillons de haute qualité contenant une quantité suffisante d'ARN viral intact.
Le test RT-PCR peut donner un résultat négatif incorrect (faux négatif) pour certains patients infectés par le COVID-19.Comme on le sait, les principaux sites d'infection du nouveau coronavirus se situent au niveau des poumons et des voies respiratoires inférieures, comme les alvéoles et les bronches.Par conséquent, l'échantillon d'expectoration d'une toux profonde ou le liquide de lavage bronchoalvéolaire (BALF) est considéré comme ayant la sensibilité la plus élevée pour la détection virale.Cependant, dans la pratique clinique, les échantillons sont souvent prélevés dans les voies respiratoires supérieures à l'aide d'écouvillons nasopharyngés ou oropharyngés.La collecte de ces échantillons est non seulement inconfortable pour les patients, mais nécessite également un personnel spécialement formé.Pour rendre l'échantillonnage moins invasif ou plus facile, dans certains cas, les patients peuvent recevoir un écouvillon buccal et leur permettre de prélever un échantillon de la muqueuse buccale ou d'écouvillonner la langue eux-mêmes.Sans suffisamment d'ARN viral, la RT-qPCR peut renvoyer un résultat de test faussement négatif.Dans la province du Hubei, en Chine, la sensibilité de la RT-PCR lors de la détection initiale n'a été rapportée qu'environ 30 % à 50 %, avec une moyenne de 40 %.Le taux élevé de faux négatifs a probablement été causé par un échantillonnage insuffisant.
De plus, le test RT-PCR nécessite un personnel hautement qualifié pour effectuer des étapes complexes d'extraction d'ARN et une procédure d'amplification par PCR.Cela nécessite également un niveau plus élevé de protection en matière de biosécurité, des installations de laboratoire spéciales et un instrument de PCR en temps réel.En Chine, le test RT-PCR pour la détection du COVID-19 doit être effectué dans des laboratoires de niveau de biosécurité 2 (BSL-2), avec une protection du personnel utilisant la pratique de niveau de biosécurité 3 (BSL-3).Dans ces conditions, de début janvier à début février 2020, la capacité du laboratoire CDC de China Wuhan n'a pu détecter que quelques centaines de cas par jour.Normalement, cela ne poserait pas de problème lors du test d'autres maladies infectieuses.Cependant, lorsqu'il s'agit d'une pandémie mondiale telle que COVID-19 avec potentiellement des millions de personnes à tester, la RT-PCR devient un problème critique en raison de ses exigences en matière d'installations de laboratoire ou d'équipements techniques spéciaux.Ces inconvénients peuvent limiter l'utilisation de la RT-PCR en tant qu'outil efficace de dépistage et peuvent également entraîner des retards dans les rapports des résultats des tests.
Méthode de détection sérologique des anticorps
Avec la progression de l'évolution de la maladie, en particulier aux stades intermédiaire et avancé, le taux de détection des anticorps est très élevé.Une étude menée à l'hôpital central sud de Wuhan a montré que le taux de détection des anticorps pouvait atteindre plus de 90 % au cours de la troisième semaine d'infection au COVID-19.De plus, l'anticorps est le produit de la réponse immunitaire humaine contre le nouveau coronavirus.Le test d'anticorps offre plusieurs avantages par rapport à la RT-PCR.Tout d'abord, les tests sérologiques d'anticorps simples et rapides.Les tests de flux latéral d'anticorps peuvent être utilisés au point de service pour fournir un résultat en 15 minutes.Deuxièmement, la cible détectée par le test sérologique est l'anticorps, qui est connu pour être beaucoup plus stable que l'ARN viral.Pendant la collecte, le transport, le stockage et les tests, les échantillons pour les tests d'anticorps sont généralement plus stables que les échantillons pour la RT-PCR.Troisièmement, parce que l'anticorps est uniformément réparti dans la circulation sanguine, il y a moins de variation d'échantillonnage par rapport au test d'acide nucléique.Le volume d'échantillon requis pour le test d'anticorps est relativement faible.Par exemple, 10 microlitres de sang prélevé par piqûre au doigt suffisent pour une utilisation dans le test de flux latéral d'anticorps.
En général, le test d'anticorps est choisi comme outil complémentaire pour la détection des acides nucléiques afin d'améliorer le taux de détection du nouveau coronavirus au cours de l'évolution de la maladie.Lorsque le test d'anticorps est utilisé avec un test d'acide nucléique, il peut augmenter la précision du test pour le diagnostic de COVID19 en réduisant les résultats faux positifs et faux négatifs potentiels.Le guide d'utilisation actuel ne recommande pas d'utiliser deux types de test séparément comme format de détection indépendant, mais doit être utilisé comme format combiné.[2]
Figure 2:L'interprétation correcte des résultats des tests d'acide nucléique et d'anticorps pour la détection d'une nouvelle infection à coronavirus
Figure 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. - Kit de test double rapide d'anticorps IgM / IgG pour nouveau coronavirus (StrongStep®Test rapide d'anticorps SARS-CoV-2 IgM/IgG, immunochromatographie au latex)
Illustration 4 :Chaulage Bio-Produits Co., Ltd. - StrongStep®Kit PCR multiplex en temps réel du nouveau coronavirus (SARS-CoV-2) (détection de trois gènes, méthode de sonde fluorescente).
Noter:Ce kit PCR très sensible et prêt à l'emploi est disponible en format lyophilisé (processus de lyophilisation) pour un stockage à long terme.Le kit peut être transporté et stocké à température ambiante et est stable pendant un an.Chaque tube de prémélange contient tous les réactifs nécessaires à l'amplification PCR, y compris la transcriptase inverse, la polymérase Taq, les amorces, les sondes et les substrats dNTP. Les utilisateurs peuvent simplement reconstituer le mélange en ajoutant de l'eau de qualité PCR avec le modèle, puis charger sur un instrument PCR pour exécuter l'amplification.
En réponse à la nouvelle épidémie de coronavirus, Liming Bio-Products Co., Ltd. a travaillé rapidement pour développer deux kits de diagnostic pour permettre aux laboratoires cliniques et de santé publique de diagnostiquer rapidement l'infection au COVID-19.Ces kits sont très adaptés pour être utilisés pour le dépistage à grande échelle dans les pays et régions où la nouvelle épidémie de coronavirus se propage rapidement, et pour fournir un diagnostic et une confirmation de l'infection au COVID-19.Ces kits doivent être utilisés uniquement dans le cadre d'une autorisation d'utilisation d'urgence pré-notifiée (PEUA).Les tests sont limités aux laboratoires certifiés conformément aux réglementations des autorités nationales ou locales.
Méthode de détection d'antigène
1. La détection des antigènes viraux est classée dans la même catégorie de détection directe que la détection des acides nucléiques.Ces méthodes de détection directe recherchent des preuves d'agents pathogènes viraux dans l'échantillon et peuvent être utilisées pour le diagnostic de confirmation.Cependant, le développement de kits de détection d'antigène nécessite des anticorps monoclonaux de haute qualité avec une forte affinité et une grande sensibilité capables de reconnaître et de capturer des virus pathogènes.Il faut généralement plus de six mois pour sélectionner et optimiser un anticorps monoclonal adapté à une utilisation dans la préparation du kit de détection d'antigène.
2. Actuellement, les réactifs pour la détection directe du nouveau coronavirus sont encore au stade de la recherche et du développement.Par conséquent, aucun kit de détection d'antigène n'a été cliniquement validé et disponible dans le commerce.Bien qu'il ait été signalé précédemment qu'une société de diagnostic à Shenzhen avait développé un kit de détection d'antigène et testé cliniquement en Espagne, la fiabilité et la précision du test n'ont pas pu être validées en raison de la présence de problèmes de qualité des réactifs.À ce jour, la NMPA (anciennement China FDA) n'a encore approuvé aucun kit de détection d'antigènes pour une utilisation clinique.En conclusion, diverses méthodes de détection ont été développées.Chaque méthode a ses avantages et ses limites.Les résultats de différentes méthodes peuvent être utilisés à des fins de vérification et de complément.
3. La production d'un kit de test COVID-19 de qualité dépend fortement de l'optimisation pendant la recherche et le développement.Chaulage Bio-Produit Co., Ltd.Les kits de test doivent répondre à des normes de fabrication et de contrôle qualité strictes pour garantir qu'ils offrent les plus hauts niveaux de performance et de cohérence.Les scientifiques de Liming Bio-Product Co., Ltd. ont plus de vingt ans d'expérience dans la conception, les tests et l'optimisation de kits de diagnostic in vitro pour garantir le plus haut niveau de performance en matière de quantification analytique.
Pendant la pandémie de COVID-19, le gouvernement chinois a fait face à une forte demande de matériel de prévention des épidémies dans les points chauds internationaux.Le 5 avril, lors de la conférence de presse du Mécanisme conjoint de prévention et de contrôle du Conseil d'État "Renforcement de la gestion de la qualité du matériel médical et réglementation de l'ordre du marché", Jiang Fan, inspecteur de premier niveau du Département du commerce extérieur du ministère of Commerce, a déclaré : « Ensuite, nous concentrerons nos efforts sur deux aspects, premièrement, pour accélérer le soutien de davantage de fournitures médicales dont la communauté internationale a besoin, et aussi, pour améliorer le contrôle de la qualité, la réglementation et la gestion des produits. Nous apporterons la contribution de la Chine à la réponse conjointe à l'épidémie mondiale et à la construction d'une communauté de destin pour l'humanité.
Illustration 5 :Le nouveau réactif coronavirus de Liming Bio-Products Co.,Ltd. a obtenu le certificat d'enregistrement CE de l'UE
Le certificat d'honneur
Houshenshan
Figure 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. a soutenu l'hôpital de montagne Vulcan (HouShenShan) de Wuhan pour lutter contre l'épidémie de COVID-19 et a reçu le certificat honorifique de la Croix-Rouge de Wuhan.L'hôpital de montagne Wuhan Vulcan est l'hôpital le plus célèbre de Chine spécialisé dans le traitement des patients atteints de COVID - 19 graves.
Alors que la nouvelle épidémie de coronavirus continue de se propager dans le monde, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. se mobilise pour soutenir et aider les communautés du monde entier avec nos technologies innovantes pour lutter contre cette menace mondiale sans précédent.Le dépistage rapide de l'infection au COVID-19 est un élément essentiel de la lutte contre cette menace.Nous continuons à contribuer de manière significative en fournissant des plateformes de diagnostic de haute qualité aux travailleurs de la santé de première ligne afin que les gens puissent recevoir les résultats des tests critiques dont ils ont besoin.Les efforts de Liming Bio-products Co., Ltd. dans la lutte contre la pandémie de COVID-19 consistent à apporter nos technologies, nos expériences et notre expertise aux communautés internationales pour la construction d'une communauté mondiale de destin.
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E-mail: sales@limingbio.com
Site Web : https://limingbio.com
Heure de publication : 01-mai-2020
